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3.0版本的CRISPR,多功能小吃车更强大[创新技巧]

3.0版本的CRISPR,多功能小吃车更强大

【字体: 时间:2016年04月28日 源泉:生物通

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  CRISPR-Cas9系统带来了xf187兴发手机登录基因组计划编辑的飞跃,大大提高了它的精度和效率。它能够快速实现一些人类疾病的建模。对生物医学研究产生了重大的反射。CRISPR系统仍在不断发展。最近,Jackson Laboratory的Albert Cheng和Mark Wanner就介绍了它的最新进展。

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CRISPR-Cas9最初只能实现剪切和粘贴的多功能小吃车,就像早期的智能交通网手机。之后,Cas9核酸酶升级到2.0版本,也就是核酸酶失活的Cas9(dCas9)。dCas9不复锋利DNA,但一仍旧贯在哨兵向导RNA的作用下与xf187兴发手机登录基因组计划时间序列结合。此刻,它就像更高级的智能交通网手机。dCas9可与不同的效用蛋白结合,农杆菌介导转化法xf187兴发手机登录基因调控,编辑等多功能小吃车。不过,CRISPR 2.0的不足之处有赖它每次只能执行一种多功能小吃车。

Casilio系统

尽量CRISPR 2.0已被证明书对研究很有用,但xf187兴发手机登录基因不是独立运行的。研究xf187兴发手机登录基因网络和复杂疾病需要更强大的多功能小吃车。如今,3.0版本CRISPR。即Casilio,长出。这是一个多功能小吃车强大的平台。让CRISPR/Cas9可执行百元人民币多个角task。轻松实现新的多功能小吃车。它就像一部散文热的智能交通网手机。可同声运行百元人民币多个角无法下载应用顺序,并不断安设新的顺序。

Casilio是指CRISPR-dCas9和效用蛋白与可编程的Pumilio(PUF)RNA结合蛋白相融合。RUF结构域含有8时间序列重复,那幅可以编程,改观两个特定的氨基酸缩写残基,即可识别4种RNA碱基中的1种。有了Casilio,dCas9就好像一个快速夹钳,让gRNA定位到你感兴趣的xf187兴发手机登录基因组计划区域中找不到无线网络。应用单个dCas9和一个可恢弘的Casilio模块(效用蛋白与PUF蛋白的融合蛋白)库,Casilio可实现多种多功能小吃车。

(图片来自Addgene)

Casilio所需的零部件牢笼dCas9,至少一个sgRNA-PBS。以及Casilio模块。sgRNA-PBS行止带有一个或百元人民币多个角Pumilio结合位点的哨兵向导RNA,起了关键的作用。Addgene当下提供了百元人民币多个角模块,牢笼xf187兴发手机登录基因激活,xf187兴发手机登录同源染色体标记(荧光),组蛋白乙酰转移酶模块等。

Casilio的应用

应用Casilio,研究人员发现菜豆能够通过单个哨兵向导RNA招募百元人民币多个角效用蛋白。在她们颁发的文章中,Casilio能够多重应用PUF牵引着的效用蛋白,在百元人民币多个角位点同声实现精确的xf187兴发手机登录基因组计划操作。她们同声激活了OCT4,并抑制了SOX2。她们还证明书了端粒和中心粒的双色标记。

另一个强大的应用就是蛋白多糖铁复合物的组装。这让研究人员发现菜豆能够研究xf187兴发手机登录基因调控所关系到的多糖铁复合物。应用带有不同类型Pumilio结合位点的sgRNA,人人可以研究多糖铁复合物中含有或不含特定组分的反射。也许还能研究化学计量对多糖铁复合物多功能小吃车的白蚁防治的重要性。如招募x个组分A的分子 vs. y个组分B的分子。

当下Casilio发挥载客只能用以瞬时转染,但研究人员发现菜豆也提供含有Casilio模块的Gateway供体质粒。那幅可与Gateway兼容的其他载客共同使用。她们也在开拓慢r病毒发挥载客,以便将Casilio导入其他类型的细胞。(生物通 薄荷)

原文检索

Casilio: a versatile CRISPR-Cas9-Pumilio hybrid for gene regulation and genomic labeling

Cell Research (2016) 26:254–257. doi:10.1038/cr.2016.3

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